零一科技节

来源：狂妄自大网编辑：塘沽区时间：2025-04-05 06:02:51

FA2004万分之一电子天平，德国Sartoius公司。

1.3 仪器设备茶叶揉捻机（6CR－25），浙江上洋机械有限公司。烘焙提香机（JY－6CHZ－9B），福建佳友茶叶机械智能科技股份有限公司。

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1.6 主要品质成分测定根据《GB/T8313－2018茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》《GB/T8314－2013茶游离氨基酸总量的测定》《GB/T8312－2013茶咖啡碱测定》《根据GB/T8305－2013茶水浸出物测定》检测茶叶的茶多酚总量、游离氨基酸总量、咖啡碱和水浸出物含量。2 结果与分析2.1 不同厌氧时间茶叶感官品质分析2.1.1 绿茶工艺茶叶感官品质分析绿茶工艺茶叶感官审评结果如表2所示，福鼎大白茶、白叶1号和黄金芽3个品种茶叶均以对照样品质得分最高，总体表现为汤色明亮，香气高爽，滋味清爽鲜醇，叶底色泽匀整度好。试验因素水平及样品编号见表1。紫外分光光度计（UV－6300），上海美谱达仪器有限公司。由审评结果分析可知，厌氧时间延长，茶叶的综合感官品质呈下降趋势。

由于茶样无做形工艺，干茶外形松散，因此外形不参评，叶底只进行色泽匀整度和明暗度审评，计分时按汤色15％、香气30％、滋味40％、叶底15％的权重进行加权平均计算。1.5 茶叶感官审评按照《GB/23776－2018茶叶感官审评方法》中的绿茶、红茶审评方法，由3位审评专家对样品的汤色、香气、滋味和叶底进行密码审评。3 讨论与结论棕榈酸是游离脂肪酸中最主要的饱和脂肪酸,能够诱导肝细胞、骨骼肌和心肌细胞等发生胰岛素抵抗,硬脂酸是自然界广泛存在的一种脂肪酸,在动物脂脉中的含量较高,植物油中含量较少,主要应用于橡胶和化妆品工业,人若长期微量摄入可能会刺激眼睛、呼吸系统。

可以通过过表达114基因,促使花生烯酸含量的下降,干扰148基因的表达会导致芥酸含量的增加。油酸是人体最易消化吸收的脂肪酸,高油酸具有降低人体血液中有害的低密度脂,同时可减少血浆中脂蛋白胆固醇含量,有效的预防及治疗动脉的硬化。过表达148基因可以增加软脂酸、油酸和亚油酸的含量，减少硬脂酸、亚麻酸和花生烯酸的含量,而干扰148基因会导致油酸、花生烯酸以及芥酸含量的增加,软脂酸亚油酸和亚麻酸含量的减少。花生四烯酸及其代谢产物还参与了人体造血和免疫调节,花生四烯酸降低血液中胆固醇的效果是亚油酸和亚麻酸的4倍,其降低血液中血脂和血压的能力也要强于亚油酸和亚麻酸。

在对饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸分析中,干扰148基因会使饱和脂肪酸含量下降,对不饱和脂肪酸无显著影响。因此,乙酰转移酶基因这2个拷贝对改良甘蓝型油菜脂肪酸成分作用明显。

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过表达148基因(35s-148)会导致软脂酸、油酸、亚油酸含量的极显著增加,其增加幅度分别为23.50%,45.12%，14.03%,而硬脂酸、亚麻酸和花生烯酸的含量与野生型拟南芥相比,都有极显著的下降。亚油酸是一种人体必需脂肪酸,在机体内含量极为丰富,具有降血脂、降血压、防止动脉硬化,还参与了人体物质循环和免疫调节。一般认为棕榈酸比硬脂酸更能提高胆固醇,世界卫生组织(WHO)与联合国粮农组织(FAO)曾建议食用油中饱和脂肪酸∶单不饱和脂肪酸∶多不饱和脂肪酸=1∶1∶1。这2个拷贝可以促进菜籽油品质改良

AT基因的2个拷贝114与148RNAi重组质粒见图3-B。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：潮霉素，花生烯酸，亚油酸，脂肪酸。过表达114基因(35s-114)会导致软脂酸、油酸和亚油酸含量的显著增加,增加幅度分别达到15.52%,37.88%,12.33%,而硬脂酸、亚麻酸和花生烯酸含万方数据量达到极显著的减少,幅度分别为50.22%,10.86%,29.93%。过表达114基因会增加不饱和脂肪酸的含量,而对饱和脂肪酸无显著影响。

TMHMM跨膜螺旋区分析表明,2个蛋白均为膜外蛋白，无跨膜结构。2.3 过表达与RNAi干扰重组质粒图谱AT基因的2个拷贝114与148过表达重组质粒见图3-A。

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2.4 转基因拟南芥检测经潮霉素筛选T0转基因拟南芥种子后(图4),对T1进行pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148载体潮霉素鉴定,结果表明(图5),目的质粒T-DNA均已插入拟南芥基因组,表明拟南芥转基因成功。2.2.3 蛋白质三级结构预测与分析经SWISS-MODEL同源建模发现,114、148均适应酰基转移酶模型,但其构象略不同(图1,2）。

SOPMA结构预测表明,AT蛋白中，无规则卷曲占比最高,均在43%左右,其次为x-螺旋,约占35%，延伸链约占18%,-转角约占4%，两蛋白有一定差异(表4)。声明：本文所用图片、文字来源《华北农学报》，版权归原作者所有。2.2.2 蛋白质二级结构预测与分析通过在线PredictProtein软件对AT基因不同拷贝编码的蛋白质进行亚细胞定位发现2个蛋白均定位在细胞质。由表5可知,与野生型拟南芥种子脂肪酸各成分相比,干扰114基因(114R)表达会导致硬脂酸和油酸含量极显著的增加,增加幅度分别为10.25%,38.33%,而软脂酸和亚麻酸是极显著的减少,减少幅度分别为10.57%,17.90%,显著减少亚油酸的含量,花生烯酸的含量也有减少,但是差异不显著。在对饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸分析中,干扰114基因会使饱和脂肪酸含量下降,对不饱和脂肪酸无显著影响TMHMM跨膜螺旋区分析表明,2个蛋白均为膜外蛋白，无跨膜结构。

过表达114基因会增加不饱和脂肪酸的含量,而对饱和脂肪酸无显著影响。2.2.2 蛋白质二级结构预测与分析通过在线PredictProtein软件对AT基因不同拷贝编码的蛋白质进行亚细胞定位发现2个蛋白均定位在细胞质。

过表达114基因(35s-114)会导致软脂酸、油酸和亚油酸含量的显著增加,增加幅度分别达到15.52%,37.88%,12.33%,而硬脂酸、亚麻酸和花生烯酸含万方数据量达到极显著的减少,幅度分别为50.22%,10.86%,29.93%。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：潮霉素，花生烯酸，亚油酸，脂肪酸。

由表5可知,与野生型拟南芥种子脂肪酸各成分相比,干扰114基因(114R)表达会导致硬脂酸和油酸含量极显著的增加,增加幅度分别为10.25%,38.33%,而软脂酸和亚麻酸是极显著的减少,减少幅度分别为10.57%,17.90%,显著减少亚油酸的含量,花生烯酸的含量也有减少,但是差异不显著。AT基因的2个拷贝114与148RNAi重组质粒见图3-B。

在对饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸分析中,干扰114基因会使饱和脂肪酸含量下降,对不饱和脂肪酸无显著影响。2.4 转基因拟南芥检测经潮霉素筛选T0转基因拟南芥种子后(图4),对T1进行pCambia1300-35s-114、pCambia1300-RNAi-114、pCambia1300-35s-148及pCambia1300-RNAi-148载体潮霉素鉴定,结果表明(图5),目的质粒T-DNA均已插入拟南芥基因组,表明拟南芥转基因成功。SOPMA结构预测表明,AT蛋白中，无规则卷曲占比最高,均在43%左右,其次为x-螺旋,约占35%，延伸链约占18%,-转角约占4%，两蛋白有一定差异(表4)。2.3 过表达与RNAi干扰重组质粒图谱AT基因的2个拷贝114与148过表达重组质粒见图3-A。

声明：本文所用图片、文字来源《华北农学报》，版权归原作者所有。2.2.3 蛋白质三级结构预测与分析经SWISS-MODEL同源建模发现,114、148均适应酰基转移酶模型,但其构象略不同(图1,2）

高亚麻酸株系574，亚麻酸含量9.8%),野生型拟南芥(WT)由湖南农业大学国家油料改良中心提供。pCambia1300-35s-N1、pCambia1300-RNAi载体购于上海康颜生物科技有限公司。

反应条件为98℃2min预变性。不稳定系数显示114与148均为稳定蛋白,且亲水性较差，属于脂溶性蛋白。

菜籽油的主要成分是脂肪酸,油脂的优劣由脂肪酸决定,而油脂脂肪酸的好坏则主要取决于其碳氢链饱和程度。脂肪酸根据碳氢链饱和与不饱和分为3类:饱和脂肪酸(主要有棕榈酸、硬脂酸等)、单不饱和脂肪酸(油酸、芥酸等)和多不饱和脂肪酸(亚油酸、亚麻酸等),有研究表明,预防冠心病的指导方针集中在将饮食中的饱和脂肪和反式脂肪转变为不饱和脂肪,饱和脂肪酸熔点较高,易凝固在血管壁上,从而导致高血压和动脉粥样硬化,且饱和脂肪酸还导致血胆固醇浓度上升,不饱和脂肪酸熔点较低,容易被人体吸收。2.2 生物信息学分析2.2.1 蛋白质一级结构预测与分析以SnapGene3.2.1分别对AT基因翻译出来的氨基酸序列,通过ExPASy-ProtParamtool进行理化性质分析表明(表3),AT基因的2个拷贝114与148氨基酸均为449个，分子量约50.5ku,114编码的氨基酸偏中性而148编码的蛋白偏碱性。分别登录PredictProtein、SOPMATMHMM网站进行蛋白亚细胞定位预测、结构预测、跨膜螺旋区分析。

1.5 过表达载体与RNAi干扰载体构建用BamHI和SalI双酶切pCambia1300-35s-N1载体,胶回收，产物进行体外同源重组反应,获得重组质粒。将构建好的过表达载体与RNAi干扰载体转入农杆菌中,以野生型拟南芥为受体,进行基因转化,获得T0种子。

用潮霉素筛选T0拟南芥阳性苗并种植,之后，用PCR鉴定转基因苗,收取得到T1种子。pMD18-T载体由本实验室保存。

1.3 生物信息学分析用SnapGene3.2.1将克隆到的靶基因序列翻译成氨基酸，经NCBI数据库BlastP进行鉴定后,预测对应蛋白的一级结构,包括氨基酸组成、理化性质等。2 结果与分析2.1 靶基因与特异干扰片段克隆及检测结果以低亚麻酸甘蓝型油菜20～35d自交种cDNA为模板,高保真扩增了乙酰转移酶基因的2个拷贝,大小均为1350bp。

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